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我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測單位檢驗(yàn)阪崎腸桿菌的需求及情況，對阪崎腸桿菌檢驗(yàn)相應(yīng)的技術(shù)改進(jìn)，使得阪崎腸桿菌檢出率較之前有很大的改進(jìn)。擴(kuò)充并完善了相關(guān)的微生物檢測試劑，使得技術(shù)操作人員能更準(zhǔn)確、快捷的檢測出目標(biāo)菌。
方案一：傳統(tǒng)微生物檢測法
依據(jù)GB 4789.40-2016食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗(yàn)，推出成套的阪崎腸桿菌檢驗(yàn)解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗(yàn)單位提供方便。
第一法 克羅諾桿菌屬定性檢驗(yàn) 操作步驟
1.1 前增菌和增菌 取檢樣100 g（mL）加入已預(yù)熱至44 ℃裝有900 mL 緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地?fù)u動至充分溶解，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h±2 h。移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2h。
1.2 分離 1.2.1 輕輕混勻mLST-Vm 肉湯培養(yǎng)物，各取增菌培養(yǎng)物1 環(huán)，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。 1.2.2 挑取至少5個可疑菌落，劃線接種于TSA 平板。25 ℃±1 ℃培養(yǎng)48 h±4 h。
1.3 鑒定 自TSA 平板上直接挑取黃色可疑菌落，進(jìn)行生化鑒定。克羅諾桿菌屬的主要生化特征見表2。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。
克羅諾桿菌屬的主要生化特征
生化試驗(yàn) | 特征 | |
黃色素產(chǎn)生 | + | |
氧化酶 | - | |
L-賴氨酸脫羧酶 | - | |
L-鳥氨酸脫羧酶 | （+） | |
L-精氨酸雙水解酶 | + | |
檸檬酸水解 | （+） | |
發(fā)酵 | D-山梨糖 | （-） |
L-鼠李糖 | + | |
D-蔗糖 | + | |
D-蜜二糖 | + | |
苦杏仁甙 | + | |
注：+＞99%陽性： -＞99%陰性；（+）90%-99%陽性；（-） | ||
1.4 結(jié)果與報(bào)告 綜合菌落形態(tài)和生化特征，報(bào)告每100 g（mL）樣品中檢出或未檢出克羅諾桿菌屬。
第二法 克羅諾桿菌屬的計(jì)數(shù) 操作步驟
2.1 樣品的稀釋 2.1.1 固體和半固體樣品：無菌稱取樣品100 g、10 g、1 g 各三份，加入已預(yù)熱至44 ℃分別盛有900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分溶解，制成1:10 樣品勻液，置36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h±2 h。分別移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。 2.1.2 液體樣品：以無菌吸管分別取樣品100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已預(yù)熱至44 ℃分別盛有900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分混勻，制成1:10 樣品勻液，置36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h±2h。分別移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。
2.2 分離、鑒定 同1.2，1.3。
2.3 結(jié)果與報(bào)告 綜合菌落形態(tài)、生化特征，根據(jù)證實(shí)為克羅諾桿菌屬的陽性管數(shù)，查MPN 檢索表，報(bào)告每100 g（mL）樣品中克羅諾桿菌屬的MPN 值（見國標(biāo)附錄Ｂ中表B.1）。
實(shí)驗(yàn)操作所用培養(yǎng)基及生化試劑
功能階段 | 實(shí)驗(yàn) | 產(chǎn)品序號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 類別 |
前增菌 | 1 | 023130 | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 250g | 瓶（干粉） |
CP0560A | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 9 ml×20支 | 盒（管裝） | ||
增菌 | 2 | 022212 | 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯基礎(chǔ)（MLST） | 250g | 瓶（干粉） |
SR0180 | 萬古霉素（改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯配套試劑） | 1 ml×10支 | 盒（西林瓶） | ||
CP0750 | 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（MLST-Vm） | 10 ml×20支 | 盒（管裝） | ||
平板分離 | 3 | CRM006 | 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI） | 1000 mL | 瓶（干粉） |
CRM006B | 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI） | 90mm×20 | 盒（平板） | ||
生化鑒定 | 4 | 024072 | 胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基)TSA | 250g | 瓶（干粉） |
024079 | 胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基)TSA | 90mm×20 | 盒（平板） | ||
5 | 029170 | 氧化酶試紙 | 10片/盒 | 盒 | |
6 | 075280 | L-賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
075290 | 氨基酸脫羧酶對照 | 20支 | 盒（西林瓶） | ||
7 | 075270 | L-鳥氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
8 | 075590 | L-精氨酸雙水解酶培養(yǎng)基 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
075600 | 精氨酸雙水解酶對照 | 20支 | 盒（西林瓶） | ||
9 | 029110 | 無菌液體石蠟 | 10 mL×1支 | 瓶 | |
10 | 075090 | D-山梨醇 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
11 | 075110 | L-鼠李糖 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
12 | 075050 | D-蔗糖 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
13 | 075560 | D-蜜二糖 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
14 | 022120 | 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基 | 250 g | 瓶（干粉） | |
15 | 071870 | 阪崎腸桿菌生化鑒定盒 | 11種×10支 | 盒（西林瓶） |
不同培養(yǎng)基下菌種顯現(xiàn)出不同的菌落形態(tài)（菌株：阪崎腸桿菌 ATCC29544）
