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我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監(jiān)測單位檢驗阪崎腸桿菌的需求及情況，對阪崎腸桿菌檢驗相應的培養(yǎng)基進行了改進，使得阪崎腸桿菌檢出率較之前有很大的改進。擴充并完善了相關(guān)的微生物檢測試劑，使得技術(shù)操作人員能更準確、快捷的檢測出目標菌。
現(xiàn)我公司，依據(jù)GB 4789.40-2010食品衛(wèi)生微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗，推出成套的阪崎腸桿菌檢驗解決方案，為生產(chǎn)企業(yè)及檢驗單位提供方便。
圖1：GB 4789.40-2010阪崎腸桿菌檢驗流程圖
表1：實驗操作所用培養(yǎng)基及生化試劑
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功能階段 |
實驗 | 產(chǎn)品序號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 類別 |
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前增菌 |
1 | 023130 | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 250g | 瓶（干粉） |
CP0560A | 緩沖蛋白胨水（BPW） | 9 ml×20支 | 盒（管裝） | ||
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增菌 |
2 | 022212 | 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯基礎（MLST） | 250g | 瓶（干粉） |
SR0180 | 萬古霉素（改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯配套試劑） | 1 ml×10支 | 盒（西林瓶） | ||
CP0750 | 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（MLST-Vm） | 10 ml×20支 | 盒（管裝） | ||
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平板分離 |
3 | CRM006 | 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI） | 1000 mL | 瓶（干粉） |
CRM006B | 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基（DFI） | 90mm×20 | 盒（平板） | ||
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生化鑒定 |
4 | 024072 | 胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基)TSA | 250g | 瓶（干粉） |
024079 | 胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基)TSA | 90mm×20 | 盒（平板） | ||
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5 | 029170 | 氧化酶試紙 | 10片/盒 | 盒 | |
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6 | 075280 | L-賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
075290 | 氨基酸脫羧酶對照 | 20支 | 盒（西林瓶） | ||
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7 | 075270 | L-鳥氨酸脫羧酶培養(yǎng)基 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
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8 | 075590 | L-精氨酸雙水解酶培養(yǎng)基 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
075600 | 精氨酸雙水解酶對照 | 20支 | 盒（西林瓶） | ||
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9 | 029110 | 無菌液體石蠟 | 10 mL×1支 | 瓶 | |
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10 | 075090 | D-山梨醇 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
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11 | 075110 | L-鼠李糖 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
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12 | 075050 | D-蔗糖 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
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13 | 075560 | D-蜜二糖 | 20支 | 盒（西林瓶） | |
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14 | 022120 | 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基 | 250 g | 瓶（干粉） | |
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15 | 071870 | 阪崎腸桿菌生化鑒定盒 | 11種×10支 | 盒（西林瓶） |
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培養(yǎng)基：阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基DFI |
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菌株：阪崎腸桿菌 ATCC29544 |
GB 4789.40-2010 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗
第一法阪崎腸桿菌的檢驗 操作步驟
1.1 前增菌和增菌
取檢樣100 g（mL）加入已預熱至44 ℃裝有900 mL 緩沖蛋白胨水的錐形瓶中，用手緩緩地搖動至充分溶解，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h±2 h。移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2h。
1.2 分離
1.2.1 輕輕混勻mLST-Vm 肉湯培養(yǎng)物，各取增菌培養(yǎng)物1 環(huán)，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。
1.2.2 挑取1 個～5 個可疑菌落，劃線接種于TSA 平板。25 ℃±1 ℃培養(yǎng)48 h±4 h。
1.3 鑒定
自TSA 平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。阪崎腸桿菌的主要生化特征見表2?？蛇x擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。
表 2 阪崎腸桿菌的主要生化特征
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生化試驗 |
特征 | |
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黃色素產(chǎn)生 |
+ | |
|
氧化酶 |
- | |
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L-賴氨酸脫羧酶 |
- | |
|
L-鳥氨酸脫羧酶 |
（+） | |
|
L-精氨酸雙水解酶 |
+ | |
|
檸檬酸水解 |
（+） | |
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發(fā)酵 |
D-山梨糖 |
（-） |
|
L-鼠李糖 |
+ | |
|
D-蔗糖 |
+ | |
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D-蜜二糖 |
+ | |
|
苦杏仁甙 |
+ | |
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注：+＞99%陽性： -＞99%陰性；（+）90%-99%陽性；（-） |
1.4 結(jié)果與報告
綜合菌落形態(tài)和生化特征，報告每100 g（mL）樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。
第二法 阪崎腸桿菌的計數(shù) 操作步驟
2.1 樣品的稀釋
2.1.1 固體和半固體樣品：無菌稱取樣品100 g、10 g、1 g 各三份，加入已預熱至44 ℃分別盛有900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分溶解，制成1:10 樣品勻液，置36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h±2 h。分別移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。
2.1.2 液體樣品：以無菌吸管分別取樣品100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已預熱至44 ℃分別盛有900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，輕輕振搖使充分混勻，制成1:10 樣品勻液，置36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h±2h。分別移取1 mL 轉(zhuǎn)種于10 mL mLST-Vm 肉湯，44 ℃±0.5 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。
2.2 分離、鑒定
同1.2，1.3。
2.3 結(jié)果與報告
綜合菌落形態(tài)、生化特征，根據(jù)證實為阪崎腸桿菌的陽性管數(shù)，查MPN 檢索表，報告每100 g（mL）樣品中阪崎腸桿菌的MPN 值（見國標附錄Ｂ中表B.1）。
相關(guān)國標下載地址：
GB 4789.40-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗（最新） |
